褪黑素（MT）檢測基于競爭性酶聯免疫吸附測定技術。抗體被預先包被在96孔板上。將標準品、測試樣品和生物素結合試劑添加到孔中并孵育。生物素標記的MT與未標記的MT之間發生競爭控制反應。然后加入HRP結合試劑，并孵育整個培養皿。
在每個階段使用洗滌緩沖液去除未結合的結合物。TMB底物用于定量HRP酶促反應。加入TMB基質后，只有含有足夠MT的孔才會產生藍色產物，然后在加入酸性停止溶液后變為黃色。黃色的強度與鍍液中MT的結合量成反比。用分光光度法在450nm的微孔板讀卡器中測量OD，由此可計算MT的濃度。
褪黑素（Melatonin，MT）是一種主要由松果體在夜間釋放的激素，長期以來一直與睡眠－覺醒周期的控制有關。褪黑素屬于吲哚雜環類化合物，又稱為松果體素、褪黑激素、褪黑色素。
褪黑素合成后，儲存在松果體內，交感神經興奮支配松果體細胞釋放褪黑素。褪黑素的分泌具有明顯的晝夜節律，白天分泌受控制，晚上分泌活躍。MT由松果腺分泌，主要與生物鐘的調節、抗氧化、抗衰老、調節胃腸運動功能，并參與肝性腦病的發病、調節情緒、生育及多種內分泌功能。
此分析具有競爭性，因此樣品中的MT濃度與測量的吸光度呈負相關。用標準濃度（y軸）和測量的平均吸光度（x軸）的對數創建一個圖表。通過標準點應用擬合趨勢線。樣品的MT濃度可以從標準曲線中插值。
