ELISA指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。
寵物獸醫ELISA檢測基本原理：
①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。
②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
③在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開，后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。
④加入酶反應的底物后，底物被酶催化變為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據顏色反應的深淺有無定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可很大地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。
雙抗夾心法
夾心法常用于檢測大分子抗原，一般的操作步驟為：
①將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體；
②加入待測檢體，檢體中若含有待測的抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結；
③洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專一的一次抗體，與待測抗原進行鍵結；
④洗去多余未鍵結一次抗體，加入帶有酶的二次抗體，與一次抗體鍵結；
⑤洗去多余未鍵結二次抗體，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結果。
寵物獸醫ELISA檢測間接法
間接法常用于檢測抗體，一般的操作步驟為：
①將已知的抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余的抗原。
②加入待測檢體，檢體中若含有待測的一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結。
③洗去多余待測檢體，加入帶有酶的二次抗體，與待測的一次抗體鍵結。
④洗去多余未鍵結二次抗體，加入酶底物使酶呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產物的含量即可測量待測抗體的含量。
競爭法
競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：
①將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體；
②加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結；
③加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結，由于塑膠孔盤上固著的抗體數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結，即所謂競爭法之由來。
④洗去檢體與帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內留下之帶有酶的抗原越少，顯色也就越淺。
注：當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時，一般會考慮使用競爭法寵物獸醫ELISA檢測。
